拉里·达利（本·斯蒂勒饰演）的生活似乎并不太安逸：他经常更换工作，没有固定的住所；妻子与他离婚，找了个证券经纪人，而他又即将再婚。他在儿子眼中的地位也岌岌可危。
为了保命，获得儿子的抚养权，达利不得不放弃“干大事”的梦想，成为纽约自然历史博物馆的一名夜班保安。
达利原本以为这是一份枯燥的工作，可上班第一天，不可思议的事情发生了：博物馆里的法老金牌拥有神奇的力量。每当夜幕降临，博物馆里的所有标本都会活过来。来到这里，追骨的霸王龙、惹是生非的猴子、暴虐的匈奴人、挖木取火的穴居人……一切都会乱成一团。在第26任总统西奥多·罗斯福的帮助下，达利终于控制住了局面，但马上又遇到了新的麻烦：有人要打出法老金牌。出于职责所在，也为了博物馆夜间的奇迹，达利不得不挺身而出。
